對于透射式,在UV,U激發(fā)時一般用優(yōu)良的消色差物鏡即可,在可見光B與G激發(fā)時,用半復(fù)消色差或復(fù)消色物鏡最為合適,用齊明物鏡也可以,雖然齊明物鏡象場不平,然而高倍物鏡用于對邊緣分辨力要求不高的試樣。一般中等以下倍率,干物鏡適用于暗場照明。高倍率的浸液物鏡不適合暗場照明,因為暗場聚光鏡照明錐光束會進(jìn)入物鏡。浸液式物鏡比干鏡頭更適宜作落射照明,因為空氣—玻璃界面反射光遠(yuǎn)比玻璃—浸液界面反射光多。熒光顯微鏡
(2)激發(fā)光不必透過載玻片,因而減少損失,而且激發(fā)光與熒光對物鏡而言方向相反,分得很開不可能產(chǎn)生互相干擾,就是有部分反射激發(fā)光進(jìn)入物鏡后也被二向色分光鏡反射至光源,僅有極小部分透過,使截止濾色片負(fù)擔(dān)小,可制成較薄的片;
(1)物鏡兼作聚光鏡,就沒有聚光鏡的定中與調(diào)焦問題,而且物鏡的數(shù)值孔徑隨倍率而增大,熒光圖像亮度也隨之提高;
(4)落射熒光的物鏡因要通過紫外區(qū)光譜,因此必須要考慮紫外段的透過率,為此專門研制UV2F透紫外區(qū)熒光物鏡系列,而透射式則不必。
(3)用透射式激發(fā)時,大部分熒光產(chǎn)生于切片底部,必須透過切片射出,而且還會產(chǎn)生散射。而落射照明和觀察面在同一表面,熒光圖象亮度毫無損耗,而且對象質(zhì)也無影響,特別對厚的切片,如菌落和組織培養(yǎng)等更具有獨(dú)特的功能;偏光顯微鏡
對于目鏡沒有特殊要求。
由兩種基本形式組合,具有更大機(jī)動性,適應(yīng)各種研究需要。
熒光檢測自1908年第一臺熒光顯微鏡問世以來,不斷地得到改進(jìn)和完善。高壓汞燈的出現(xiàn);多層鍍膜技術(shù)滿足了激發(fā)和截止濾色片的要求;高性能優(yōu)質(zhì)光學(xué)系統(tǒng)的熒光顯微鏡出現(xiàn),也促使了80年代免疫熒光的發(fā)展。90年代問世的激光掃描共焦顯微鏡能進(jìn)行熒光圖像分析,測定細(xì)胞內(nèi)的熒光分布和組織切片的熒光分布測定;還可實時獲得相襯—熒光重疊圖像和雙重?zé)晒鈽?biāo)記的原色圖像,它是在熒光顯微鏡基礎(chǔ)上發(fā)展起來的光、機(jī)、電、算一體化的新一代產(chǎn)品??缛胄率兰o(jì)后,熒光檢測和熒光顯微鏡將會得到更迅猛的發(fā)展。
圖中透射(明場或暗場)用來搜索定位,也可以用來比較熒光部位和不發(fā)熒光部位的細(xì)微結(jié)構(gòu);(d)和(e)也有相同的功能。(d)中使用相襯時,要用相襯物鏡,交替進(jìn)行熒光觀察和相襯觀察,進(jìn)行比較;(e)中偏光觀察適用于雙折射物質(zhì),(c)中落射熒光和透射熒光的組合適用于雙重染色,如同時進(jìn)行FITC和TRITC雙重染色,則可用落射觀察TRITC,用透射觀察FITC標(biāo)識過的部位。
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